期刊简介

               本刊系医药卫生类综合性学术期刊,主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述,也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。                

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  • 杂志名称:徐州医科大学学报杂志
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:徐州医科大学
  • 国际刊号:2096-3882
  • 国内刊号:32-1875/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录:知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
徐州医科大学学报杂志2012年第12期

肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达

李德鹏;桑威;李振宇;黄一虹;张奎;徐开林

关键词:人肝细胞生长因子, TA克隆, 亚克隆, 真核表达载体
摘要:目的 克隆人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)的编码基因,构建真核表达载体,获得hHGF蛋白.方法 从含hHGF的人肝脏组织总RNA中,利用RT-PCR方法扩增出hHGF cDNA;利用TA克隆技术,将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1+质粒,转化E.coli DH5α细胞,鉴定pcDNA3.1+-hHGF重组质粒.将重组质粒pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞,应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达.结果 ①测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列一致.②重组质粒pcDNA3.1+-hHGF是具有表达功能的真核表达质粒.③ pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞,于转染后12、24、48、72 h均能检测到hHGF表达.结论 成功构建hHGF真核表达载体,获得分泌性hHGF蛋白.