期刊简介
本刊系医药卫生类综合性学术期刊，主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述，也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。
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首页>徐州医科大学学报杂志
- 杂志名称：徐州医科大学学报杂志
- 主管单位：江苏省教育厅
- 主办单位：徐州医科大学
- 国际刊号：2096-3882
- 国内刊号：32-1875/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
大鼠Fas shRNA真核表达质粒的构建及其生物活性的鉴定
李海龙；温儒民；薛松；肖永双；孙晓青
关键词：Fas蛋白(CD95), RNA干扰, shRNA, 移植免疫耐受
摘要：目的 构建大鼠Fas shRNA真核表达重组质粒,并检测其对NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)Fas基因的沉默效率,筛选出一个有效干扰质粒.方法 按照siRNA设计原则,在大鼠Fas基因mRNA上挑选4个干扰靶序列,再根据靶序列分别设计并合成两端含有酶切位点的总长度为64 bp的shRNA转录模板DNA正、反义寡核苷酸链,并将其退火后克隆至空载体pSliencerTM3.1-H1 neo siRNA Expression Vector中,对其进行鉴定.用Lipofectamine LTX Reagent将pSilencer Fas(1～4)4个重组质粒转染至大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)内,以pSilencer-EGFP shRNA和pEGFP-N1质粒共转染做阳性对照,经过G418压力性筛选后,使用RT-PCR和蛋白免疫印迹法分析针对Fas基因构建的4个重组质粒的有效性,筛选出有效的干扰质粒.结果 pSilencer-Fas (1~4) shRNA及pSilencer-EGFP shRNA重组质粒测序结果与预期序列相同.RT-PCR及蛋白免疫印迹结果显示pSilencer-Fas4 shRNA对Fas基因在mRNA水平和蛋白水平的抑制率均高,分别达到(78.9±3.2)%和(64.5±4.62)%.结论 利用RNA干扰技术沉默大鼠Fas基因,可以降低大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Fas的表达.
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