期刊简介
本刊系医药卫生类综合性学术期刊，主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述，也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。
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首页>徐州医科大学学报杂志
- 杂志名称：徐州医科大学学报杂志
- 主管单位：江苏省教育厅
- 主办单位：徐州医科大学
- 国际刊号：2096-3882
- 国内刊号：32-1875/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
大鼠4-1BB基因shRNA表达质粒的构建、鉴定和筛选
侍阳；宋庆伟；于生才；周晓俊；殷骏；钱海鑫
关键词：4-1BB(CD137), 小干扰RNA, 基因沉默
摘要：目的 为研究小干扰RNA(siRNA)在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用,构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法 根据RNA干扰(RNAi)作用原理,设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA(shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758) DNA片段,插入质粒pGPU6,构建4个编码目的shRNA的表达质粒(p441、p540、p621、p758),酶切及测序鉴定.设对照组,利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞,48 h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)检测其对T细胞4-1BB基因表达的抑制作用,并筛选、确定佳效果的干扰质粒.结果 酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒p441、p540 、p621和p758,转染T细胞后,4-1BB相对表达量分别为(33.4±2.3)％、(53.0±2.3)％、(62.1±3.1)％、(40.9±1.5)％,对照组4-1BB相对表达量为(67.2±1.5)％.其中p441沉默效果佳(P＜0.01).结论 siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用,干涉靶点具有选择性.
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