期刊简介
本刊系医药卫生类综合性学术期刊，主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述，也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。
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首页>徐州医科大学学报杂志
- 杂志名称：徐州医科大学学报杂志
- 主管单位：江苏省教育厅
- 主办单位：徐州医科大学
- 国际刊号：2096-3882
- 国内刊号：32-1875/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
socs3基因3'端非翻译区野生型与突变型载体的构建及活性鉴定
牛立萍；寇艳波；王静；吴清源；房贤达；周峰；郑葵阳；汤仁仙；刘晓梅
关键词：微RNA, 细胞因子信号抑制蛋白-3, 3'端非翻译区, 虫荧光素酶报告载体
摘要：目的 研究非编码小RNA-1896(miRNA-1896)和miRNA-409-3p对细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,socs3)基因的调控作用,构建socs3基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)野生型和突变型重组荧光素酶报告载体.方法 以原代培养的小鼠星形胶质细胞总cDNA为模板,通过点突变和缺失突变的方式分别对socs3 3'-UTR序列中miRNA-1896和miRNA-409-3p种子区的结合位点CAGAGA(897～902位)和AACATT(1425～1430位)进行突变,并将野生型的3'-UTR序列与突变的3'-UTR序列分别插入到虫荧光素酶表达质粒pGL3-Promoter获得重组质粒,命名为pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2.将上述重组质粒分别与miRNA-1896和miRNA-409-3p共转染至HEK293T细胞中,测定虫荧光素酶的活性.结果 酶切验证及测序结果表明,重组质粒pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2构建成功.与对照组相比,转染miRNA-1896和miRNA-409-3p均显著降低了pGL3-SOCS3-WT虫荧光素酶的活性,但对pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2荧光素酶的活性并无明显影响.结论 成功构建了socs3 3'-UTR野生型及突变型的虫荧光素酶重组表达质粒,确认CAGAGA(897 ～ 902位)和AACATT(1425～1430位)分别是miRNA-1896和miRNA-409-3p种子区与socs3 3'-UTR结合的关键位点.
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