期刊简介

               本刊系医药卫生类综合性学术期刊,主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述,也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。                

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  • 杂志名称:徐州医科大学学报杂志
  • 主管单位:江苏省教育厅
  • 主办单位:徐州医科大学
  • 国际刊号:2096-3882
  • 国内刊号:32-1875/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录:知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
徐州医科大学学报杂志2017年第05期

小鼠原代胸腺上皮细胞分离方法的比较与优化

夏洁云;袁姝姝;付瑞雪;王军杰;徐开林;赵恺

关键词:胸腺上皮细胞, 单细胞分离, 胶原酶, 中性蛋白酶, 密度梯度离心法
摘要:目的 比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞(TEC)分离方法的效果,筛选简单、高效、实用的分离方法.方法 将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组:胶原酶Ⅰ组 (Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml)、DispaseⅡ组 (DisⅡ组, 3 mg/ml)、Col IE+低浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-L组, 0.75 mg/ml)、Col IE+中浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-M组, 1.5 mg/ml)、Col IE+高浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-H组, 3 mg/ml).优选出适消化方法后,将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组.采用血细胞计数板进行总细胞数计数,台盼蓝染色法观察细胞的活性;使用流式细胞术检测胸腺基质细胞(TSC)以及TEC的比例.结果 与单独使用DisⅡ与Col IE相比,Col IE与不同浓度Dis Ⅱ联合使用均能加快胸腺组织消化(P<0.01),获取单个胸腺的总细胞数较多,尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳(P<0.05或P<0.01).与单独使用酶消化组相比,Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例(P<0.01).与Percoll对照组相比,Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例(P<0.05).此外,各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞.结论 Col IE与DisⅡ联合消化,结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC.