期刊简介
本刊系医药卫生类综合性学术期刊，主要刊登医学基础研究、临床实验研究、预防医学和全科医学方面的论著、综述，也刊登临床方法学、经验介绍方面的论文。
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首页>徐州医科大学学报杂志
- 杂志名称：徐州医科大学学报杂志
- 主管单位：江苏省教育厅
- 主办单位：徐州医科大学
- 国际刊号：2096-3882
- 国内刊号：32-1875/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1992年徐州市科技期刊一等奖期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
敲除U266细胞株VEGF-A抑制小鼠M2型巨噬细胞迁移的相关研究
李雯靖；李艳杰；王立金；张倩男；陆倩；李振宇
关键词：多发性骨髓瘤, 血管内皮生长因子-A, M2型巨噬细胞, CRISPR/Cas9技术, 迁移
摘要：目的 初步探索敲除U266细胞株中血管内皮生长因子(VEGF) - A基因及该细胞株对小鼠M2型巨噬细胞迁移的影响.方法 在无菌超净台取6～8周龄C57/B6小鼠骨髓细胞,加入20％L929细胞培养上清(提供M -CSF)的10％1640,体外培养6天左右,获得骨髓来源巨噬细胞MO(BMDMs);流式细胞术检测MO型巨噬细胞标志F4/80/CDllb;TranSWell实验观察不同浓度小鼠VEGF - A对MO型巨噬细胞迁移影响;向MO巨噬细胞中加入脂多糖(LPS)、干扰素(IFN)-γ、小鼠IL-4培养48 h,获得M1、M2型巨噬细胞,流式细胞术分别检测M1、M2型巨噬细胞标志F4/80/CD16/32、F4/80/CD206;CRISPR/Cas9技术敲除U266细胞中VEGF - A,采用嘌呤霉素筛选,再用稀释法进行单克隆筛选,Western blot鉴定敲除成功细胞株,用于后续实验;将敲除成功细胞株与M2型巨噬细胞进行非接触式共培养,观察该细胞株对M2型巨噬细胞迁移影响.结果 体外诱导MO型巨噬细胞表达率为90％以上,Ml型巨噬细胞、M2型巨噬细胞诱导表达率均为90％以上;Transwell实验结果 显示不同浓度小鼠VEGF - A对MO型巨噬细胞迁移能力不全相同(P ＜0. 05);应用Western blot技术已鉴定出VEGF - A敲除成功的U266细胞株及该细胞株能抑制M2型巨噬细胞迁移(P＜0. 05).结论 在体外实验中,CRISPR/Cas9技术敲除U266细胞株中VEGF - A基因后能抑制M2型巨噬细胞迁移.因此,针对调节肿瘤相关巨噬细胞的小分子制剂可能为治疗多发性骨髓瘤提供新的思路.
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